操作要点
培养基的配制 酵母菌活化培养基：马铃薯200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，琼脂15~20g，蒸馏水1000mL，自然pH，121℃灭菌20min；醋酸菌活化培养基：酵母浸膏10g，葡萄糖10g，碳酸钙15g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH6.8，121℃灭菌20min，培养基冷却至50℃左右，加入4%的无水乙醇；红茶菌发酵培养基：将7g绿茶添加到1000ml沸水中，浸提20min，再将一定量的蔗糖加入到茶液中，混匀溶解后进行分装，250mL三角瓶的装液量为120mL，用八层纱布封口，并用牛皮纸包扎，进行巴氏灭菌，冷却至室温后备用。
固定化细胞的制备 将5.5%的海藻酸钠和
1.5%的明胶充分溶解，灭菌后待其温度降至室温时，将细胞浓度均约为3x10cell/mL的酵母菌菌悬液和醋酸菌菌悬液分别与等体积的固定化载体溶液充分混匀，混匀后的酵母菌混合液和醋酸菌混合液再分别用注射器滴入到0.51%的氯化钙溶液中，固定1h后用无菌水冲洗，重新加入0.51%的氯化钙溶液，4℃平衡过夜，即可制得固定化酵母菌颗粒、固定化醋酸菌颗粒121.2.3 单因素实验 红茶菌固定化后转入红茶菌发酵培养基，在30℃，150rmin的恒温摇床中培养，发酵结束后，测定发酵液中的总酸含量、总糖利用率并对发酵液进行感官评价，以此为参考指标，探讨蔗糖添加量、接种量、菌种比例以及发酵时间等因素对固定化细胞共生发酵红茶菌饮料的影响，每个实验重复3次。
蔗糖添加量 固定接种量7.5%，菌种比例5：5，发酵时间6d，考察不同蔗糖添加量50、60.70，80.90100g/L，对固定化细胞共生发酵红茶菌饮料的影响。
接种量 固定蔗糖添加量80g/L，菌种比例5：5，发酵时间6d，考察不同接种量2.5%、5.0%、7.5%10%、12.5%，15%对固定化细胞共生发酵红茶菌饮料的影响。
菌种比例 固定蔗糖添加量80g/L，接种量7.5%，发酵时间为6d，考察不同菌种比例3：7、4：6.5：56：4.7：3.8：2（酵母菌J：醋酸菌C，vlv）对固定化细胞共生发酵红茶菌饮料的影响。
发酵时间 固定蔗糖添加量80g/L，接种量7.5%，菌种比例5：5，考察不同发酵时间2.4.6.8，10d对固定化细胞共生发酵红茶菌饮料的影响。
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荷叶粉的浸提：将经过紫外线杀菌处理后的荷叶粉放入烧杯中，按料液比1:20-1:30加入水作为提取剂，在50-70℃条件下，边搅拌边浸泡3-4h，提取荷叶中的营养物质和黄酮类化合物，制得荷叶提取液。