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菌种分离及培养：将配好的培养基装入无菌试管中，每管装10-15mL,装6管，将其放于45℃水浴锅中保温待用.取市售酸奶1mL，用无菌水稀释成三个稀释度，并用三个稀释度向45℃水浴中保温的试管中接种.接种量1m,.每个稀释度接两管，冷却至42℃放·睡温培养箱中培养。取生长较好的试管在无菌环境中用酒精灯于外部均匀加热，待管壁融化时，将琼脂柱倒入无菌培养皿中，用灭过菌的剃须刀将无破裂的菌落切开，用接种针挑至斜面上，于41℃培养箱中培养。挑取接种处的菌落用革兰氏染色法鉴定,结果为乳酸菌。
菌种驯化：斜面种子--牛奶苹果汁(牛奶:苹果汁=6:4)--培养--牛奶苹果汁(牛奶:苹果汁=4:6)--培养--牛奶苹果汁(牛奶:苹果汁=2:8)--培养--牛奶苹果汁(牛奶:苹果汁== 1:9)--培养、纯苹果汁--培养
上述牛奶苹果汁及苹果汁的杀菌条件为:115℃15min·培养条件为:40℃,4h
切块、热烫：将苹果切成2cmx2cmxlcm大小的块，切后即浸入1H4的柠檬酸缓冲液中·称取苹果块放入等量的100℃沸水中热烫3-4min .捞出后用冷水冷却。
榨汁、过滤：在苹果块中加入0.1%的Vc:及0.02%的半眺氛酸141，用榨汁机榨汁，榨出的果汁应通
过滤布进行过滤，分离出果肉浆，在果肉浆中氧化酶和果胶酶的含量要比果汁中多，若果汁中果肉浆含量过多，在杀菌操作时，往往产生焦糊，滤布以60目为宜。
调配：因苹果汁中的糖被乳酸菌利用后酸度降低，使成品口感较酸，经实验确定加入3%的蔗糖。
杀菌：过滤后立即进行杀菌，杀菌温度根据实验晾合考虑后采用90℃，杀菌时间以20min效果较好。
接种、发酵：将驯化后的斜面种子接种在苹果汁中进行种子培养，在40℃下培养4h，按接种量5%将种子接入灭菌并冷却到40℃的苹果汁中，摇匀后放入40℃的发酵室中培养4h。
茶汤的提取
茶叶选用:选用去杂的中档茶叶，因为上等茶叶除了其芳香物质含量较高的优点外，其化学成分与中档茶叶大致相仿，但价格较贵，会增加生产原料成本。提取前将茶叶粉碎，以提高浸提率。
茶汤的浸提:为了提高茶叶的利用率，采用二次浸提合并的方法。第一次：茶：水=1：10，浸提时间25min：第二次：茶：水=1：10，浸提时间20min.将两次所得的茶汤用纱布过滤两次1。
培养液中糖的种类以及糖含量的选择对于糖的选择和含量根据实际需要调整合适，质量要符合国家标准。本实验选用的是葡萄糖14.3 红茶菌基液的制备:将糖液和茶汤按一定比例进行混合，得到红茶菌基液，然后进行杀菌，杀菌条件为100℃，15-20min.
接种:把乳酸菌和醋酸菌接种到红茶菌基液中，其接入的量为4%，在42℃保温，发酵1d后，调整温度至30℃左右，最后接入酵母菌，其接入的量为0.2%15.0114.5 后阶段培养酵母菌接种以后，用消过毒的纱布和盖盘把容器盖好，这样既可适当通气，又防尘埃污染，然后放在恒温箱里，不能振动和搅拌，温度保持在28~30℃，进行培养。
过滤:培养好的红茶菌，严格消毒杀菌，采用真空抽滤器进行抽滤，连续进行两次过滤后，取其滤液。
茶菌酒饮料的调配按一定的比例，将基酒与红茶菌培养后得到的滤液进行调配，得到红茶菌酒饮料。调配的比例根据产品的质量和口感确定。
结果与分析
提液pH的选择:取2g茶叶样品，将茶叶分别用100ml pH为3.04.0，5.0，6.0，7.0的85℃热水浸提，pH对茶饮料浸提的影响结果.从实验结果可知，茶汤在pH4.0时光密度最大，表明在此pH值下，茶汤中浸提物的量最多，茶沉淀的发生量最多，而随着pH的增加，光密度减少，即沉淀物逐渐减少。在pH3.0-7.0内，当pH <4.0时，茶汤色差，pH >6.0时茶饮料逐渐呈红褐色，pH5.0~6.0处的茶饮料的色泽较好。当pH <5.0时，可以感觉到酸味，pH过高，茶饮料提取液易发生褐变，所以茶饮料提取液的pH应控制在5.0-6.0的范围。
浸提温度的选择:取2g茶叶样品，在不同的温度（50，60，70.85100℃），pH值=5的100ml水中浸提25min.茶饮料浸提温度的选择是以使茶汤的滋味适中、茶汤中沉淀较少，且色度透明为准。实验结果表明，当浸提温度为85℃时，茶汤的浊度较小，而透明度保持较高，香气较好，滋味柔和，随着浸提温度的升高，红茶中可溶性物质浸出率会进一步增加，容易产生沉淀，且温度过高，香气成分溢出过多，香气浓，滋味有苦涩感。而温度过低时，因为有效成分浸出不足，香气淡薄，滋味平淡。
浸提时间的选择:取2g茶叶样品加入85℃的100ml水（pH值为6）中，经不同的浸提时间（分别为5，10，15，20，25、30min）后，抽滤，观察其香味，测其色度和浊度。结果可知，随着浸提时间的增加，浸提液的颜色逐渐变深，浊度逐渐增大，当提时间达25 min后，浊度变化减少。这是由于随着浸提时间的增加，茶叶中的咖啡碱和茶多酚以及其它可溶性物质的浸出速率逐渐减慢的缘故。综合色度、浊度、香气及口感的实验结果，浸提时间以25min为最佳。
发酵过程中菌落形态变化情况接入酵母菌后，在恒温培养箱中，温度控制在28~30℃之间进行培养。通过观察菌落的生长形态变化，可以从直观掌握茶菌共生体系的生长、繁殖及发酵情况，从而调节培养条件。培养过程中菌落变化情况。在培养期间不能震动、搅拌，温度保持在的最适生长温度，如果菌母细胞一直不浮起并无气泡出现，也无酸味，说明发酵过程没有正常进行，菌母已死亡，应重新培养。结果表明，在培养箱中培养10d后，发酵达到稳定状态，红茶菌液完全生成。